제    조   사 : Oxoid
유 효 기 간 : 1825일
판 매 상 태 : 판매중
보           관 : 10~30℃
용           도 : 미생물 선택 구별

500g

CM0813B

Escherichia coli O157의 검출을 위한 선택 및 분별 배지.

첨가제를 넣지 않으면 식품공전의 MacConkey Sorbitol 한천 배지(MacConkey Sorbitol Agar, 배지43)와 동일하며, 첨가제 Cefixime Tellurite를 넣으면 식품공전의 TC-SMAC 한천배지(Tellurite Cefixime-Sortbitol MacConkey Agar, 배지66)와 동일한 조성이다.

조성(Typical Formulation)

성분*

gm/litre

Peptone

20.0

Sorbitol

10.0

Bile salts No.3

1.5

Sodium chloride

5.0

Neutral red

0.03

Crystal violet

0.001

Agar

15.0

pH 7.1 ± 0.2 @ 25°C

*성능표준을 위해 조절될 수 있음

 

조제 (Directions)

1리터의 정제수에 51.5g을 현탁하고 끓여서 완전히 녹인다. 121°C에서 15분간 오토클레이브로 멸균한다. 50°C로 식힌 후 멸균 페트리 접시에 붓는다.(SMAC)

 

Cefixime-Tellurite Supplement (SR0172)를 첨가하는 경우:

Vial contents

per vial

per litre

Potassium tellurite

1.25mg

2.5mg

Cefixime

0.025mg

0.05mg

1리터의 정제수에 51.5g을 현탁하고 끓여서 완전히 녹인다. 121°C에서 15분간 오토클레이브로 멸균한다. 50°C로 식힌 후, 설명서에 따라 재구성한 2바이알의 SR0172를 무균적으로 첨가하고 잘 혼합한 후 멸균 페트리 접시에 붓는다.(CT-SMAC, TC-SMAC) 

 

사용(Technique)

1.    조제법에 따라 배지를 만든 후 평판에 붓는다. 필요시 한천 표면을 건조시킨다.

2.    분리된 집락을 얻기 위해, 시료 (식품, 분변 등) 현탁액을 평판에 접종한다.

3.    35°C에서 24시간 배양한다. Doyle Schoeni10의 보고에 의하면 35-37°CE.coli O157의 성장에 최적인 온도이다. 44-45.5°C에서의 성장은 빈약하며, 48시간 동안 배양해도 마찬가지다.

 

24시간 이후에 평판을 판독하는 것을 피해야 한다. Sorbitol 발효 집락의 색상 강도가 약해지고 비 발효 집락들과의 대조가 감소되기 때문이다. Pseudomonas, Proteus, Klebsiella 등의 기타 그람-음성 미생물은 Sorbitol MacConkey Agar에 성장할 수 있지만 집락 성상의 차이로 일반적으로 구별할 수 있다.

진단 시약인 Escherichia coli O157 Latex test(DR0620)를 이용하여 의심집락에 대해서 즉시적인 확인 시험이 가능하다.

 

주의사항 (Precautions)

거의 대부분의 E.coli O157 균주들이 Sorbitol MacConkey Agar상에서 전형적인 성상을 보이지만 일부 균주는 그렇지 않다11. Sorbitol MacConkey AgarE.coli VTEC 균주들을 검출하기 위한 유일한 수단으로 사용해서는 안된다. 일부 비 독성 균주들이 sorbitol을 발효시키지 못하기 때문이다12.

SMAC CT-SMAC은 숙련된 미생물학자에 의해 체외진단용으로만 사용한다. 유효기간이 초과되었거나 어떤 성능저하의 흔적이 있는 경우 사용하지 않는다.

 

제한점 (Limitations)

비전형적인 효소 패턴을 가지는 미생물들이 비정상적인 결과를 나타낼수도 있다.

설명(Description)

Escherichia coli O157은 출혈성 대장염(haemorrhagic colitis)의 원인으로 인정된다1,2,3,4,5. 따라서 중요한 인간 질병원이다.

Sorbitol MacConkey Agar는 병원성 E. coli O157의 분리에 권장된다. Rappaport Henig6에 의해 기술된 조성에 기반하며, lactosesorbitol로 대체된 것을 제외하고는 MacConkey Agar No.3와 동일하다. E.coli O157sorbitol을 발효시키지 못하여 무색의 집락을 형성한다. 반면에 대부분의 E.coli 균주들은 sorbitol을 발효시켜서 분홍색 집락을 형성한다. Sorbitol MacConkey Agar의 효율은 March Ratnam7에 의해 확인되었다. 이 연구자들에 의하면 민감도 100%, 특이도 85%이고 E.coli O157을 스크리닝하기 위한 간단하고, 비싸지 않으며, 빠르고, 신뢰할 만한 수단으로서 이 배지를 권고하였다.

Chapman 및 공동 연구자들8 Sorbitol MacConkey Agarcefixime potassium tellurite를 첨가하여 배지의 선택성을 향상시켰다. 해당 농도의 potassium tellurite는 다른 E.coli 혈청군으로부터 혈청군 O157을 선택하고 Providencia Aeromonas 종들을 억제한다. CefiximeProteus spp.에 대해서 억제적이다.

 

E.coli O157:H7의 분리를 위한 Sorbitol MacConkey Agar에서Cefixime tellurite의 사용은 FDA 세균학적 분석 매뉴얼9에 기술되어 있다.

저장 조건 및 유효기간(Storage conditions and Shelf life)

분말배지 : 원래 용기에 완전히 밀봉하여 10-30°C에서 보관. 라벨에 표시된 유효기한 전 까지 사용

첨가제 SR0172 : 0°C 이하의 암실에 보관.

조제배지 : 2-8°C에서 최대 2주간 차광보관. 건조 방지. 더 긴 보관기간이 가능할 수도 있지만 해당 조건에서 검증(validation)이 필요하다.

 

성상 (Appearance)

분말배지 : 짚색/분홍색의 유동성 분말

조제배지 : 암적색 젤

 

품질관리(Quality Control)

첨가제 제외할 경우

양성대조군

예상 결과

Escherichia coli O157:H7 Non-toxigenic NCTC12900 *

Good growth; 1-2mm straw colonies

음성대조군

예상 결과

Escherichia coli ATCC® 25922 *

Good growth; 1-2mm pink colonies

첨가제 SR0172 사용한 경우

양성대조군

예상 결과

Escherichia coli O157:H7 Non-toxigenic NCTC12900 *

Good growth; 1-2mm straw colonies

음성대조군

예상 결과

Escherichia coli ATCC® 25922 *

No growth/pinpoint-0.25mm pink colonies

* Culti-Loop® 판매되고 있음


  

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