조성(Typical Formulation)
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성분* |
gm/litre |
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Heart
muscle |
454.0 |
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Peptone |
10.0 |
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`Lab-Lemco’ powder |
10.0 |
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Sodium
chloride |
5.0 |
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Glucose |
2.0 |
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pH 7.2 ± 0.2 @ 25°C |
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*성능표준을 위해 조절될 수 있음 |
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조제 (Directions)
10g을 100ml의 정제수에 현탁한다. 15분간 방치하여 고기 입자들에 수분이 스며들게 한다. 121°C 에서 15분간 오토클레이브하여 멸균한다. 비등(ebullition)으로 인해 고기 입자들이 용기에서 빠져나갈
수 있으므로 용기를 급격히 식히지 않도록 한다.
설명(Description)
심장 조직으로 제조된 cooked meat
medium은 혐기성 및 호기성 미생물들의 배양을 위해 잘 확립된 배지이다1.
아주 작은 양의 접종체에서 세균 성장이 가능하게 해주며 장기간 동안 배양물의
생존을 유지시켜준다. 혼합 세균 배양물은 보다 느리게 성장하는 미생물들을 대체시키지 않으면서 이 배지에서
생존이 가능하다. 성장 생성물이 접종 미생물을 빠르게 파괴하지 않으며 따라서 호기성 및 혐기성 세균들을
위한 최고의 배지이다.
이 조성에 glucose를 첨가하면
짧은 시간에 혐기성 세균들의 빠르고 많은 성장을 이룰 수 있고 중요한 혐기성균들의 보다 빠른 동정이 가능하게된다.
향상된 성장은 또한 혐기성 세균들의 GLC 동정을 향상시켜준다.
현탁 액체배지의 투명도 증가는 특히 대부분의 미생물들의 성장 증가와 조합되면
성장의 초기 검출이 가능하게 해준다. 더 느리게 성장하는 균주들은
45시간 배양으로 성장을 검출할 수 있다.
사용(Technique)
혐기성 배양 (Anaerobic
Culture)
새로 신선하게 만든 배지를 약 35°C가 되는 순간 바로 사용하는 것이 좋다. 만든 날에 사용하지 못한
배지는 산소 제거를 위해 약 15분간 끓는 수조나 스팀기에 배양한 후 혼합하지 않고 식힌 후에 접종을
하도록 한다.
접종은 고기 입자가 있는 바닥 근처에서 이루어져야 한다.
Clostridia는 배지에 대한 해당 생물의 작용에 따라
2가지 그룹으로 나눈다.
(i) 당분해성 생물(Saccharolytic
organisms)
산 및 기체의 빠른
생선이 있지만 고기의 분해는 일어나지 않는다. 배양액은 약간 쓴 냄새가 나고, 붉은색 단백질을 가진다.
(ii) 단백질 분해성 생물(Proteolytic
organisms)
단백질 분해과정으로
고기의 분해가 일어나 부패한 냄새의 황 화합물의 생성과 흑색화가 일어난다. 그러나 일부 당분해성 균주들
또한 황화수소를 생성하며 이것이 흑색화를 초래하지만 정도는 약하다.
호기성 배양 (Aerobic Culture)
배지에 든 시험관은
뚜껑을 느슨하게 하고 밀봉하지 않는다. 호기성균들은 배지 상단에서 성장하고 보다 혐기성인 종들은 더
깊은 곳에서 성장한다.
배양 (Incubation)
호기성 생물 : 뚜껑을 느슨하게 한 상태로 35°C에서 최대 7일간 배양한다. 매일
탁도, 기체 또는 고기 입자의 변화를 관찰한다.
혐기성 생물: 신선하게 환원된 배지를 사용하고 35°C에서 최대 21일간 배양한다. 배지
변화를 매일 관찰한다. 주기적으로 사진을 찍고 계대배양을 한다.
보관 균주의 유지
35°C에서의 초기 배양후에 실온에 유지한다. 매 4~6개월마다 계대배양한다.
주의사항(Precautions)
이 배지의 훌륭한
회복 특성은 검체 접종 후 혼합 배양체가 나타나는 것이 일반적임을 의미한다.
이 배지의 흑색화는
pH가 산성이면 일어나지 않는다.
탄수화물 발효는
단백질 분해를 억제할 수 있다.