제    조   사 : Oxoid
유 효 기 간 : 1825일
판 매 상 태 : 판매중
보           관 : 10~30'C
용           도 : 미생물 일반 증균

500g

CM0043B

coli-aerogenes군의 분별을 위한 Methyl-red 시험과 Voges-Proskauer 시험에 권장되는 배지 

조성

 

성분*gm/litre
Peptone7.0
Glucose5.0
Phosphate buffer5.0
pH 6.9 ± 0.2 @ 25ºC
*성능표준을 위해 조절될 있음

 

조제

17g을 1리터의 정제수에 첨가하고, 잘 혼합한다. 최종 용기에 분주하고 121°C에서 15분간 오토클레이브하여 멸균한다.

 

설명

이 glucose-phosphate 배지는 coli-aerogenes 그룹의 분별을 위해, Methyl-red 및 Voges-Proskauer 시험에 권장된다1.

Smith2Enterobacter aerogenesEscherichia coli에 비해 산의 생산이 낮다는 것을 알았다. Clark 및 Lubs3는 수소이온 농도 지시자로 methyl-red를 사용하여 coli-typhoid 그룹의 구성원을 분별하였다. 메틸-레드 시험으로 알려진 이 시험법은 pH를 4.4이하로 낮추기 위해 glucose로부터 대량의 산을 생성할 수 있는 미생물과 pH를 낮추지 못하는 미생물들을 구별할 수 있다.

pH값의 차이는 methyl-red를 배양액에 첨가하여 육안으로 확인할 수 있다. (< pH4.4 적색. pH 5.0~5.8 오렌지색, >pH6.0 노란색)

 

결과색상 변화미생물
MR양성오렌지에서 적색Escherichia coli, Citrobacter spp. and others
MR음성오렌지에서 노란색Enterobacter spp., Klebsiella pneumoniae and others

 

Voges & Proskauer4는 glucose 배지의 특정 미생물 배양액에 potassium hydroxide를 첨가한 후에 적색 형광 발색이 나타나는 것을 발견하였다. 그 발색은 diacetyl기를 생성하는 acetylmethyl-carbinol의 산화에 기인하며, diacetyl기는 배지의 peptone과 반응하여 적색을 나타낸다5,6. Durham7은 Enterobacter aerogenes가 양성 결과를 보이지만 Escherichia coli는 발색을 보이지 않음을 발견하였는데, 이것은 나중에 lactose 발효 대장균군 미생물에 대해서 Methyl-red 및 Voges-Proskauer8,9 시험간의 음의 상관관계가 있었다는 것이 밝혀졌다.

결과 색상 변화 미생물
VP양성 적색 Enterobacter spp. and others
VP음성 무색 Escherichia coliand others

 

사용

10ml의 MRVP가 든 시험관을 Peptone Water(CM0009)에서 배양한 2백금이 만큼의 4~6시간된 순수배양물을 접종한다.

MR 시험을 위해 48시간 정도 35°C에서 배양하거나 더 일반적으로는 30°C에서 3~5일간 배양한다.

접종량이 많거나 35°C에서 18~24시간동안 배양하면 빠른 결과를 얻을 수 있다10. 빠른 VP 시험은 접종량이 많고 35°C에서 4~5시간동안 수조에서 수행될 수 있다. 일부 미생물(Hafnia alvei)은 양성 VP 결과를 보이려면 25°C에서 배양이 필요하다.

배양 후에 배양액 일부를 취해서 5방울의 0.4% w/v methyl-red 용액을 첨가한 후 배지 표면의 색상을 즉시 관찰한다.

배양액 다른 일부는 다음 방법에 따라서 VP 반응을 시험한다:

1. 3ml의 5% w/v alcoholic a-naphthol 용액과 3ml의 40% w/v KOH 용액을 첨가한다 (Barritt's 방법12)

2. 미량의 creatine(0.3% w/v 용액 2방울)과 5ml의 40% KOH 용액을 첨가한다 (O'Meara's 방법)

밝은 분홍색 또는 eosin red 색상이 30초간 가벼운 혼합후에 나타날 것이다. 분홍색이 양성이며, 무색은 음성이다.

Barry 및 Feeney14는 Barritt's 시약에 creatine을 넣어서 신속 결과를 얻었다.


주의사항

MR-VP 반응은 미생물 동정에 필요한 시험의 일부일 뿐이다.

각 실험실은 접종물의 밀도, 액체배지의 부피, 그리고 시험 용기 크기에 대해서 표준화하는 것이 좋다.

MR 시험은 pH 지시약을 넣기전에 최소 48시간의 배양이 필요하다.

Barritt's 시약들이 사용될 때 a-naphthol을 먼저 넣고 pH 지시약을 다음에 넣는다.

Vaughn등15은 완료된 시험이 1시간 이상 방치된다면 위양성의 VP 반응이 나타날 수 있음을 경고하였다.

저장 및 유효기간

분말배지 : 10-30°C에서 라벨의 표시 유효기간까지 사용

조제배지 : 2-6°C

 

성상

분말배지 : 짚색의 유동성 배지

조제배지 : 짚색의 용액

 

양성대조군예상 결과
Positive MR: 
Escherichia coli ATCC® 25922 *Turbid growth; red methyl red
Positive VP: 
Enterobacter cloacae ATCC® 23355 *Turbid growth; red Vogues-Proskauer
음성대조군예상 결과
Negative MR: 
Enterobacter cloacae ATCC® 23355 *Turbid growth; no colour change (MR)
Negative VP: 
Escherichia coli ATCC® 25922 *Turbid growth; no colour change (VP)
* Culti-Loop® 판매되고 있음

 

 1. DHSS Report 71 (1982) `The Bacteriological Examination of Drinking Water Supplies’ HMSO London.

2. Smith T. (1895) Amer. J. Med. Sci. 110. 283.

3. Clark W. M. and Lubs H. A. (1915) J. Inf. Dis. 17. 160-173.

4. Voges O. and Proskauer B. (1898) Z. f. Hyg. 28. 20-22.

5. Harden A. and Walpole G. S. (1906) Proc. Roy. Soc. B. 77. 399

6. Harden A. and Norris D. (1911) J. Physiol. 42. 332.

7. Durham H. E. (1900-1901) J. Exper. Med. 5. 353-388.

8. Levine M. (1916a) J. Bact. 1. 87.

9. Levine M. (1916b) J. Bact. 1. 153-164.

10. Barry A. L., Bernsohn K. L., Adams A. B. and Thrupp L. D. (1970) Appl. Microbiol. 20. 866-870.

11. Cowan S. T. & Steel K. J. (1966) Manual for the Identification of Medical Bacteria. Cambridge University Press. pp. 32-33.

12. Barritt M. M. (1936) J. Path. Bact. 42. 441-454.

13. O’Meara R. A. Q. (1931) J. Path. Bact. 34. 401-

14. Barry A. L. and Feeney K. L. (1967) Appl. Microbiol. 15. 1138-1141.

15. Vaughn R., Mitchell N. B. and Levine M. (1939) J. Amer. Water Works Assoc. 31. 993.

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