조성
| 성분* | gm/litre |
| Peptone | 7.0 |
| Glucose | 5.0 |
| Phosphate buffer | 5.0 |
| pH 6.9 ± 0.2 @ 25ºC | |
| *성능표준을 위해 조절될 수 있음 | |
조제
17g을 1리터의 정제수에 첨가하고, 잘 혼합한다. 최종 용기에 분주하고 121°C에서 15분간 오토클레이브하여 멸균한다.
설명
이 glucose-phosphate 배지는 coli-aerogenes 그룹의 분별을 위해, Methyl-red 및 Voges-Proskauer 시험에 권장된다1.
Smith2는 Enterobacter aerogenes가 Escherichia coli에 비해 산의 생산이 낮다는 것을 알았다. Clark 및 Lubs3는 수소이온 농도 지시자로 methyl-red를 사용하여 coli-typhoid 그룹의 구성원을 분별하였다. 메틸-레드 시험으로 알려진 이 시험법은 pH를 4.4이하로 낮추기 위해 glucose로부터 대량의 산을 생성할 수 있는 미생물과 pH를 낮추지 못하는 미생물들을 구별할 수 있다.
pH값의 차이는 methyl-red를 배양액에 첨가하여 육안으로 확인할 수 있다. (< pH4.4 적색. pH 5.0~5.8 오렌지색, >pH6.0 노란색)
| 결과 | 색상 변화 | 미생물 |
| MR양성 | 오렌지에서 적색 | Escherichia coli, Citrobacter spp. and others |
| MR음성 | 오렌지에서 노란색 | Enterobacter spp., Klebsiella pneumoniae and others |
Voges & Proskauer4는 glucose 배지의 특정 미생물 배양액에 potassium hydroxide를 첨가한 후에 적색 형광 발색이 나타나는 것을 발견하였다. 그 발색은 diacetyl기를 생성하는 acetylmethyl-carbinol의 산화에 기인하며, diacetyl기는 배지의 peptone과 반응하여 적색을 나타낸다5,6. Durham7은 Enterobacter aerogenes가 양성 결과를 보이지만 Escherichia coli는 발색을 보이지 않음을 발견하였는데, 이것은 나중에 lactose 발효 대장균군 미생물에 대해서 Methyl-red 및 Voges-Proskauer8,9 시험간의 음의 상관관계가 있었다는 것이 밝혀졌다.
| 결과 | 색상 변화 | 미생물 |
| VP양성 | 적색 | Enterobacter spp. and others |
| VP음성 | 무색 | Escherichia coliand others |
사용
10ml의 MRVP가 든 시험관을 Peptone Water(CM0009)에서 배양한 2백금이 만큼의 4~6시간된 순수배양물을 접종한다.
MR 시험을 위해 48시간 정도 35°C에서 배양하거나 더 일반적으로는 30°C에서 3~5일간 배양한다.
접종량이 많거나 35°C에서 18~24시간동안 배양하면 빠른 결과를 얻을 수 있다10. 빠른 VP 시험은 접종량이 많고 35°C에서 4~5시간동안 수조에서 수행될 수 있다. 일부 미생물(Hafnia alvei)은 양성 VP 결과를 보이려면 25°C에서 배양이 필요하다.
배양 후에 배양액 일부를 취해서 5방울의 0.4% w/v methyl-red 용액을 첨가한 후 배지 표면의 색상을 즉시 관찰한다.
배양액 다른 일부는 다음 방법에 따라서 VP 반응을 시험한다:
1. 3ml의 5% w/v alcoholic a-naphthol 용액과 3ml의 40% w/v KOH 용액을 첨가한다 (Barritt's 방법12)
2. 미량의 creatine(0.3% w/v 용액 2방울)과 5ml의 40% KOH 용액을 첨가한다 (O'Meara's 방법)
밝은 분홍색 또는 eosin red 색상이 30초간 가벼운 혼합후에 나타날 것이다. 분홍색이 양성이며, 무색은 음성이다.
Barry 및 Feeney14는 Barritt's 시약에 creatine을 넣어서 신속 결과를 얻었다.
주의사항
MR-VP 반응은 미생물 동정에 필요한 시험의 일부일 뿐이다.
각 실험실은 접종물의 밀도, 액체배지의 부피, 그리고 시험 용기 크기에 대해서 표준화하는 것이 좋다.
MR 시험은 pH 지시약을 넣기전에 최소 48시간의 배양이 필요하다.
Barritt's 시약들이 사용될 때 a-naphthol을 먼저 넣고 pH 지시약을 다음에 넣는다.
Vaughn등15은 완료된 시험이 1시간 이상 방치된다면 위양성의 VP 반응이 나타날 수 있음을 경고하였다.